北京亿森宝生物科技有限公司技术部
继三聚氰胺事件以来，乳品安全已受到瞩目，对乳品源头的安全检测越来越重视，而对乳品源头——奶牛牧场各方面的检测技术也在不断的更新与发展，其中酶联免疫吸附测定（ELISA）技术与PCR检测技术是目前应用广的两项技术。
ELISA是在免疫荧光和组织化学基础上发展起来的一种新技术，该技术的建立被认为是血清学实验的一场革命，是目前令人瞩目的有发展前途的一种新技术。该技术的原理：抗体（抗原）与酶结合后，与相应的抗原（抗体）发生特异性结合反应，将待检样品事先吸附在固相载体表面；加入酶标抗体（抗原）后，酶标抗体（抗原）与吸附在固相载体上的相应的抗原（抗体）发生特异性结合反应，形成酶标记的免疫复合物，不能被缓冲液冲掉；当加入酶的底物时，底物发生化学反应，呈现颜色变化，颜色的深浅与待测抗原或抗体的量相关，借助分光光度计的光吸收计算抗原（抗体）的量，也可用肉眼定性观察，因此可定量或定性的测定抗原或抗体。
该技术具有特异性强，灵敏度高、重复性好，操作简单等优势，广泛应用于动物疫病及乳品安全等方面的检测。
目前的奶牛早孕速测及真菌毒素试剂盒就利用此原理研制。奶牛早孕速测盒通过检测牛奶中孕酮含量来确认奶牛是否怀孕。孕酮是奶牛在发情周期（一般为21天）中由黄体期卵巢产生的激素，可以进入血液、乳汁和唾液中。一般受精后约13天，妊娠牛的血浆孕酮含量开始比未妊娠牛高，在受精后21天血浆孕酮浓度更高。乳汁中孕酮浓度变化和血浆中孕酮浓度的变化是一致的。而孕酮极易溶解在乳脂内，每一单位体积的乳中孕酮浓度高于血浆或血清，加之乳样采取容易，没有侵入性，故多用乳样测定孕酮。
使用该类奶牛早孕速测试剂盒无需准备其他实验器材，只需取配种20天奶牛乳汁于小杯中，按试剂盒操作说明滴加检测试剂即可，操作简便，20分钟内即可检出结果，结果准确可靠，阳性结果准确率达95%。奶牛早孕试剂盒的应用可尽早检测空怀奶牛，缩短空怀期，提高奶牛繁殖率以达到提高产奶量的目的。
众所周知，黄曲霉、赭曲霉及雪腐镰刀菌等是一类有毒真菌。其原因是它们的代谢产物中含有有毒物质真菌毒素，会致癌及引起畜禽中毒。采用Elisa技术原理制备的Elisa试剂盒可直接定量检测这些真菌毒素，准确率高，一小时即可检出结果，快速、简单、客观并且经济。
Elisa试剂盒除应用于真菌毒素检测及奶牛早孕检测，还可以应用于牛奶、饲料中兽药残留检测，在奶牛是否感染布病、口蹄疫、结核杆菌、性病毒BVDV、支原体等疫病的检测诊断方面也有应用，具有广泛的应用价值。
PCR技术是一种分子生物学技术，它的原理是体外模拟DNA复制过程，经过变性（两条DNA单链分开），退火（合成引物与靶序列配对），延伸（在DNA聚合酶作用下合成新的DNA链）等过程，可在短短几小时内，将极少量的基因组DNA或RNA样品中的特定基因片段扩增上百万倍。
实时荧光定量PCR反应，即在此基础上，在引物上引入了荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行，PCR 反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增
荧光PCR技术较常规PCR技术检测更快捷，更直观，更准确，更灵敏。此技术广泛应用于动物疫病检测。以奶牛感染布氏杆菌荧光PCR试剂盒为例，该试剂盒是根据布氏杆菌基因组保守序列设计的特定引物，并在引物5’端加上荧光基团，在3’端加上荧光淬灭基因，即荧光引物。操作时取待检测奶牛淋巴结1g或全血3-5ml或鲜奶样10ml，裂解提取DNA，以该DNA为模板进行PCR扩增，两个小时即可检出结果，检测限达1×102拷贝/ml。当模板有布氏杆菌序列时，荧光引物与模板配对，在Taq DNA聚合酶作用下延伸时，该荧光基团与荧光淬灭基因分离，此时收集到该荧光基团的荧光信号，随着循环数的增加，收集的荧光信号强度随之增加，判断此样品为阳性。若是样品中没有布氏杆菌，则荧光引物不能与模板配对，不能进行PCR扩增，此时则检测到的荧光信号基本成一条直线，判断为阴性（图1）。
采用荧光PCR技术检测动物疫病，不需要观察动物的外观表现，即使是在潜伏期，只要少量取样，在几个小时内就能准确判定出疾病原因，可提早做出相应防护措施控制疫情，避免人力物力的浪费，减少损失。以此原理制备的荧光PCR试剂盒已经在奶牛布病、口蹄疫、结核杆菌、性病毒BVDV、支原体等疫病的检测诊断等方面都已有应用。
随着社会的发展与检测规范的不断完善，Elisa技术与PCR技术的应用范围将越来越广。